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RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表達感受態細胞

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
K0003 RTS BL21(DE3) Chaprone助溶表達感受態細胞 10T 800
BL21(DE3)Chaprone感受態細胞中含有分子伴侶蛋白質粒,其表達產物可協助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。分子伴侶蛋白質粒為氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表達受控于四環素(tetR)操縱子,因此該感受態不適用于氯霉素抗性表達質粒的轉化。
BL21(DE3)Chaprone感受態細胞使用HaiGene獨有的化學感受態專利技術制備,其室溫可保存1個月、-20°C可保存2年(推薦保存溫度)、-80°C可長期保存性能無下降。運輸過程中無需干冰,可室溫運輸、可常規冰袋運輸(推薦運輸溫度)。該感受態細胞為熱激感受態細胞,轉用于蛋白表達(不可用于克隆和載體構建),經42°C熱激1min可獲得105~106cfu/μg效價,可滿足質粒轉化要求。該制品使用簡單、運輸、儲存方便。

組分

組分名稱 數量
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell(10T) 1瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 ml

儲存

RTS系列感受態為干粉形式,均可室溫保存3天,長期保存-20°C(2年)。經Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態必須分裝后,并于-60°C以下保存。溶解后的感受態細胞避免反復凍融,在-60°C以下可保存6個月。

使用方法

1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent徹底融化,放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支凍干感受態細胞中,并分裝到10支1.5 ml EP管中(每支30 μl),于-60°C以下保存(或立即使用)。
2. 將10~100 ng質粒DNA(不可使用連接產物、不可使用氯霉素篩選標記質粒)加入到分裝的感受態細胞中,輕彈EP管(或槍頭輕輕吹打),置于冰上15min。
3. 置于42°C熱激1 min后,迅速置于冰上急冷2 min。
4. 熱激完畢后,向上述感受態細胞中加入450 μL不含抗生素的SOC(或LB)培養基,37°C振蕩(225 rpm)培養60 min。使質粒上抗性標記基因表達,菌體復蘇。
5. 取200 μl復蘇菌液涂布到含相應抗生素的LB瓊脂平板表面。(含相應質粒抗生素和20 μg/ml氯霉素)
6. 將平板置于37 °C培養,12~18小時后可出現菌落。
7. 挑選生長良好的菌落,接入LB培養基(含相應質粒抗生素,20 μg/ml氯霉素),37℃劇烈振蕩培養過夜。
8. 1/50比例接入新的LB培養基(含相應質粒抗生素,20 μg/ml氯霉素,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃劇烈振蕩培養至菌體密度OD600約0.3(約2h)。
9. 加入終濃度2 ng/ml四環素(誘導chaprone伴侶蛋白表達),37℃劇烈振蕩培養至OD600約0.5(約2~4h)。
10. 加入適量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振蕩培養24h(培養搖床無法制冷條件下,室溫誘導8~12h)。
11. 4,000 rpm室溫離心15 min,收集細胞,進行蛋白表達和可溶性表達分析。
 
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