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LAMP-TaqMan檢測試劑盒

恒溫熒光檢測技術———基因檢測的終極方案:15~25分鐘內,穩定檢測單Copy基因
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A3808 LAMP-TaqMan檢測試劑盒開發服務 詢價  
 
已開發產品
A380801A 非洲豬瘟LAMP-TaqMan超敏恒溫熒光檢測試劑盒(單拷貝水平) 50T(瓶) 1750
A380801B 48T(八聯管) 2400
A380806 NOS Ter LAMP-TaqMan超敏恒溫熒光檢測試劑盒(單拷貝水平) 50T(瓶) 1750
LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)是一種新型的滾環擴增技術,在恒溫條件下,呈指數級別放大核酸分子,30分鐘內將DNA放大109~1010倍。其快速、恒溫的獨特技術優勢,使得LAMP技術成為開發診斷試劑的明星潛力技術。由于在LAMP擴增中用到很高濃度的引物,因此難免保證有少量錯配和引物Dimer,這些輕微的污染都會導致LAMP高速的擴增中造成假陽性檢測。無論采用SYBR Green、濁度、HNB等各種顯色方法都很難產生高特異性的信號。因此從公布至今有近20年的時間,其仍然無法在診斷試劑領域獲得廣泛應用。因此,將類似標準定量PCR中的TaqMan探針技術應用到LAMP檢測中,一直是分子生物家追求的目標。至今,雖有多種探針設計方案,但均無法滿足準確、可靠、快速的要求。
2019年,HaiGene在開發非洲豬瘟快檢試劑的實驗過程中,由分子生物學工具酶領域的專家-張森博士領導的研發團隊研發出了具有鏈置換活性和探針切割活性的DNA聚合酶-Bst 5.0,并將該酶成功用于LAMP和TaqMan探針組成的熒光檢測系統上。應用該項技術后,在利用LAMP快速、高靈敏度、恒溫檢測優點的基礎上,徹底解決了LAMP技術的假陽性問題。將TaqMan探針應用于LAMP擴增體系后,為LAMP技術更加廣泛的應用于臨床診斷奠定了堅實的基礎。
注:本產品為定制開發型產品,具體信息請來電或郵件咨詢。如需訂購,請發送基因序列信息至[email protected], 我公司負責引物和探針的制備。

主要特征

  • 快速檢測:可在15~25min內完成檢測。
  • 靈敏度高:可穩定的檢測到單拷貝。
  • 特異性高:六條特異性引物和一條TaqMan探針,保證了產物的特異性和檢測的可靠性。
  • 操作簡單:恒溫檢測。
  • 匹配便攜式小型設備、可野外操作
  • 適合粗樣品的檢測,無需核酸純化制備
  • LAMP TaqMan與TaqMan PCR的原理比較

    LAMP TaqMan 擴增試劑盒

    LAMP TaqMan與TaqMan PCR的差異比較

      TaqMan PCR法 LAMP TaqMan法
    擴增條件 95-60℃循環變性、復性擴增 60℃恒溫滾環擴增
    引物靶標區域 3個特異性區域 9個特異性區域
    信號放大級別 倍數級(增加2倍/循環) 指數級(增加107倍/min)
    探針形式 雙標記切割探針 雙標記切割探針
    報告基團 熒光基團,通常FAM 熒光基團,通常FAM
    反應時間 35~60min 15~25min
    是否可采用粗制核酸 全血或溶血樣品必須提取核酸 所有樣品可直接使用
    所需的設備 標準定量PCR儀 可以使用標準定量PCR儀 也可以使用便攜式恒溫熒光儀
    是否可野外操作 可以
    敏感度 >50 Copy易判讀 單Copy易判讀
    特異性 偶有假陽性 無假陽性

    LAMP TaqMan與TaqMan PCR的敏感性和特異性比較

    以非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)外膜蛋白P72為靶基因(GenBank No.:AY578706)為例, 分別應用LAMP-TaqMan和TaqMan qPCR法檢測相同模板(標準質粒和病樣),對其檢測結果進行比較如下。
    1、采用標準質粒進行靈敏度測試
    結果顯示TaqMan PCR法在100 copy以上是容易判讀的,在10 copy以下并不容易判讀;而LAMP TaqMan在5 copy的情況下仍然擴增有力,可以清晰判讀。這得益于LAMP 107/min的復制能力,從擴增曲線可得知,在起峰后2~3min內,信號即可達到平臺期,而且總體反應時間<20min,15min即可判讀結果。
    2、采用制備的病料DNA基因組進行靈敏度測試
    將病料基因組DNA做梯度稀釋進行測試,結果顯示TaqMan PCR法在pg級(25~50 copy)以上是容易判讀;而LAMP TaqMan在fg水平的情況下仍然可以清晰判讀。從結果來看128fg的基因組DNA中含有單copy的病毒分子。
    3、對低濃度模板的檢測穩定性比較
    結果顯示TaqMan PCR法在5到10 copy的模板量條件下(8重復實驗),判讀較困難。而LAMP TaqMan在2 copy模板的條件下仍然清晰且穩定地判讀(8重復實驗)。
    4、LAMP TaqMan在便攜式恒溫熒光檢測儀上的表現
    結果顯示:在小型便攜式恒溫熒光檢測儀上,LAMP TaqMan同樣表現出色。其表現出來的敏感性、特異性、穩定性、結果的可靠性,遠遠超出任何其它恒溫檢測技術。
    5、LAMP TaqMan對于低病毒含量粗制樣品的檢測較TaqMan qPCR效果更佳
    結果顯示:對于病毒含量極低的樣品采用粗制品檢測,LAMP-TaqMan方法檢測的4個樣品擴增有力,結果更加清晰可判,因此LAMP-TaqMan方法完全符合低病毒含量樣本粗制品的檢測要求。

    LAMP TaqMan試劑形式

    由于LAMP TaqMan引物和探針組合的設計工作仍然有相當的難度和不確定性,目前HaiGene提供的僅為代開發和委托生產形式,銷售和開發版權歸屬委托單位(但必須獲得HaiGene的技術授權)。在不久的將來,HaiGene將推出設計軟件,并將所有診斷試劑開發流程開放。目前HaiGene提供的為凍干全試劑狀態,凍干品包含Bst 5.0 DNA聚合酶、引物探針、dNTP和保護劑等,復溶后(為1x濃度)直接使用,提供50T/瓶和單支裝兩種形式。
    (1)生產容易,批次穩定,保存、運輸穩定,造價低。
    (2)所有機器通用,根據設備需要用戶自備反應管或板。
    (3)復溶后試劑需要-20℃保存,且短期內用完。
    (4)適合檢測樣品量較大的單位使用。
    (1)生產難度大、次品率高、成本高、成品保質期低于瓶裝試劑。
    (2)目前僅提供透明0.2ml EP管,不適用于BioRad、Roche等定量PCR機型。
    (3)使用方便,不受樣品數限制。加入20μl溶解液后,再加入1μl模板即可上機反應。
    (4)適合樣品量較少、或練習等試驗。適合恒溫熒光檢測儀,野外檢測用。
    让2球胜平负什么意思