客戶服務熱線
400-0470-600

訂購需知

郵箱:[email protected]

電話:400-0470-600

傳真:0451-58864810

郵箱:訂單下載

qq:876341716

Gibson無縫連接試劑盒

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
D2601 Gibson無縫連接試劑盒 10T/50T 600/2,000
Gibson無縫連接試劑盒是一種混合酶系統,其可將任意方法線性化的載體和與其兩端具有重疊區域的一個或多個PCR片段定向重組連接。該方法不依賴于T4 DNA連接酶,不受載體和目的片段的酶切位點限制,可在30分鐘內實現PCR片段高效定向無縫克隆至載體的任意位置,從而獲得完整的雙鏈DNA分子。該試劑盒使用簡單,只需加入合適比例的載體和PCR片段在50℃孵育15-30min即可完成片段的連接。

優勢

  • 不受載體或插入片段酶切位點限制在任意位置進行無縫克隆
  • 不依賴于T4連接酶,高效連接,無堿基缺失
  • 可同時高效連接一個或多個PCR片段
  • 無需額外的亞克隆,菌檢陽性率高達95%
  • 原理

  • T5外切酶可從雙鏈DNA5'端切割形成3'突出末端, 從而促進重疊區域的具有互補序列的片段進行退火。
  • G5 高保真DNA聚合酶可使退火的片段向3'端延伸,從而填補片段缺口。
  • Taq DNA連接酶可封閉缺刻從而獲得完整的雙鏈DNA分子。
  • Gibson無縫克隆試劑盒

    組分

    組分名稱 10T 50T
    2XGibson Assemble Mix 50μl 250μl

    儲存

    -20℃可保存2年,-80℃可保存5年,避免反復凍融。

    檢測效果和應用實例

    1. KpnI/HindIII酶切pCold-sumo-M vector獲得線性化載體,插入與載體有25nt同源臂的引物擴增Gp32基因(966bp),然后應用2xGiboson Assembly Mix連接線性化載體和Gp32,50℃孵育15min,然后取5μl連接產物轉化DH5a感受態細胞,涂板過夜后菌檢。其中左圖為長斑情況對比,A為對照(不加片段)B為實驗組(Gp32片段),右圖為挑取32個斑進行PCR擴增后電泳,其中陽性檢出率為31/32(~97%)。
    2.PCR 擴增pCold-sumo-M vector獲得線性化載體,插入與載體有15nt同源臂的引物擴增Bsu基因(1.4kb),然后應用2xGiboson Assembly Mix連接線性化載體和Bst,50℃孵育30min,然后取5μl連接產物轉化DH5a感受態細胞,涂板過夜后菌檢。其中左圖為長斑情況對比,A為對照(不加片段)B為實驗組(Bsu片段),右圖為挑取40個斑進行PCR擴增后電泳,其中陽性檢出率為40/40(~100%)。
    3. KpnI/HindIII酶切pCold-sumo-M vector獲得線性化載體,插入與載體有25nt同源臂的引物擴增Gp32基因(966bp),加入的載體與片段的摩爾比分別是1:1、1:2、1:3的長斑情況對比,其中1:3時長斑數量最多,三者菌檢陽性率無顯著差異。
    让2球胜平负什么意思